熒光濾光片的典型特征是截止深度深，自發(fā)熒光小，而且要求透射面形好，利于熒光成像的提取。所以較好的熒光濾光片采用單片無色透明的玻璃作為基底，在玻璃的兩個表面鍍膜。相比常規(guī)的用多片膠合或顏色玻璃輔助截止的熒光濾光片，單片式在熒光成像上有明顯優(yōu)勢，但由于單片式的熒光濾光片的制作難度很高，所以成本較高。
 

　　熒光濾光片組由以下部件組成：
 

　　·激發(fā)濾光片，限制激發(fā)光的波長范圍；
 

　　·二向色鏡分色片，將激發(fā)光反射到樣品，并將較長波長的發(fā)射光傳輸到探測器；
 

　　·發(fā)射濾光片，將發(fā)射熒光的有限波長范圍傳遞到探測器。

 

　　在熒光濾光片組中，激發(fā)通帶位于熒光團的激發(fā)光譜之上，而發(fā)射通帶位于熒光團的發(fā)射光譜之上。設置兩個通帶以獲得更佳結果的能力取決于斯托克斯位移，即熒光團的峰值激發(fā)波長和峰值發(fā)射波長之間的納米間隔。許多流行的熒光探針具有較小的斯托克斯位移，小于其波長的3%。盡管這些探針的激發(fā)和發(fā)射通帶通常會放在一起，相反，短斯托克斯-位移熒光團的更典型的模式，長波長激發(fā)通帶邊緣和短波長發(fā)射通帶邊緣之間的所謂間隙相對于熒光團的交叉點非常不對稱，在該交叉點，歸一化的激發(fā)和發(fā)射曲線交叉。
 

　　這種不對稱性將發(fā)射濾光片通帶向外推到更長的波長，結果是發(fā)射濾光片捕獲的發(fā)射光更少，濾光片組性能降低。由于兩個原因，間隙很難減小：(1)減小的間隙導致較高水平的激發(fā)光通過，即從樣品平面反射到發(fā)射濾光片中的激發(fā)光；(2)制造可變性限制了我們將兩個光譜邊緣放置在狹窄間隙中的能力，而不會冒著兩個濾光片邊緣在較深OD處發(fā)生交叉的風險。